Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии

ISSN 2075-1818


Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии

ВЫПУСКИ ЖУРНАЛА ЗА 2018 ГОД



УДК 619:579

МЕТОДОЛОГИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К ИЗУЧЕНИЮ ФОРМИРОВАНИЯ БИОПЛЕНОК УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫМИ И ПАТОГЕННЫМИ ЭНТЕРОБАКТЕРИЯМИ


Авторы


Описание

Для изучения процесса образования биопленок микроорганизмы культивировали в 96-луночных планшетах, на мясо-пептонном бульоне, окрашивали 0,1%-м раствором кристаллического фиолетового в течение 10...15 мин, после чего не связавшийся краситель смывали. Количественный учет связанного красителя осуществляли методом спектрофотометрии при длине волны 490 нм. Предложена методика приготовления препаратов бактерий для световой и сканирующей электронной микроскопии на покровных стеклах, погруженных в чашки Петри с жидкой питательной средой. Взвесь бактерий в концентрации 105 м.к/мл в объеме 5 мл встряхивали на аппарате Vortex и вносили в чашки Петри с 20 мл мясо-пептонного бульона.

На стерильных предметных стеклах располагали стерильные обезжиренные покровные стекла и погружали их в жидкую питательную среду в чашках Петри.

Материал инкубировали в течение 18…24 ч при температуре 37°С. Затем пинцетом извлекали покровные стекла и часть из них окрашивали 1%-м водным раствором метиленового синего (для световой микроскопии), а часть размещали в чашках Петри с уложенными на дно фильтрами (для электронной микроскопии). Последние в целях сохранения естественной архитектоники прижизненно фиксировали парами 25%-го глутарового альдегида в течение 3...5 ч. Для контрастирования препаратов использовали пары 2...4%-го раствора осмиевой кислоты в течение 2...3-мин. После обработки парами осмиевой кислоты биопленки с включенными бактериями приобретали желтоватый или коричневый цвет. Полученные препараты после обезвоживания парами пропиленоксида и напыления ионами золота просматривали в сканирующем электронном микроскопе (СЭМ). Методика позволяет без нарушения естественной архитектоники изучать фазы развития биопленок и получать объективные данные о морфологии популяций патогенных и условно-патогенных бактерий.

Показано, что интенсивность образования биопленок патогенными микро-организмами, такими как сальмонеллы, иерсинии, золотистый стафилококк, была несколько выше, чем у непатогенных: эшерихий, протея, цитробактера, энтеро-бактера.


Ключевые слова

формирование биопленок, морфология популяций бактерий, устойчивость бактерий.



НАШИ ПАРТНЕРЫ

  • Российская академия народного хозяйства и государственной службы при Президенте Российской Федерации
  • Финансовый университет при Правительстве Российской Федерации
  • Российский экономический университет имени Г. В. Плеханова
  • МГТУ им. Н.Э.Баумана
  • Компания «Р.О.С.Т.У.»